酶標(biāo)儀，即酶聯(lián)免疫檢測儀器，是酶聯(lián)免疫吸附試驗的專用儀器，又稱微孔板檢測器。酶標(biāo)儀驗證是確保其性能符合使用要求的重要步驟，主要包括以下方面：

一、酶標(biāo)儀的基本原理

酶標(biāo)儀主要由光路系統(tǒng)與信號采集系統(tǒng)組成。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上。光電檢測器將光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號，經(jīng)過一系列信號處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計算，最后顯示結(jié)果。

二、酶標(biāo)儀的分類

1. 按自動化程度分類：酶標(biāo)儀在使用過程中分為半自動和全自動兩種，但工作原理基本一致。

2. 按濾光方式分類：酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長范圍內(nèi)的任意波長；而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的濾光片，只能截取特定波長進(jìn)行檢測。

3. 按功能分類：酶標(biāo)儀可以分為單功能酶標(biāo)儀（分為光吸收、熒光、化學(xué)發(fā)光等）和多功能酶標(biāo)儀。多功能酶標(biāo)儀是兩種或更多檢測模塊的集成，通常情況下至少可提供光吸收、熒光這兩種最常見檢測功能，而一些中GD多功能酶標(biāo)儀還可支持化學(xué)發(fā)光、時間分辨熒光、熒光偏振、生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移，甚至還可以支持“Western Blot"和“上轉(zhuǎn)換發(fā)光"等檢測。

三、酶標(biāo)儀的驗證內(nèi)容

1. 安裝確認(rèn)：主要進(jìn)行文件確認(rèn)、安裝環(huán)境的確認(rèn)等。

2. 運行確認(rèn)：主要進(jìn)行功能確認(rèn)（軟件和硬件）、示值讀數(shù)測試。

3. 性能確認(rèn)：主要進(jìn)行波長、吸光度、發(fā)光測試等。

四、酶標(biāo)儀性能評價與鑒定方法

1. 濾光片波長精度檢查及其峰值測定：用高精度紫外可見分光光度計（波長精度±0.3nm）對不同波長的濾光片進(jìn)行光譜掃描，檢測值與標(biāo)定值之差即為濾光片波長精度，其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好，波長精度越高。

2. 靈敏度和準(zhǔn)確度的監(jiān)測：

• 靈敏度：精確配制6ug/ml重鉻酸鉀（干燥）溶液（0.05mol/L硫酸溶解），加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中，以0.05mol/L硫酸溶液作空白，于450nm（參比波長650nm）測定，其吸光度應(yīng)≥0.01A。

• 準(zhǔn)確度：準(zhǔn)確配制1mmol/L對硝基苯酚（提純品）水溶液，然后以10mmol/L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之，加入200ul稀釋液于小孔杯中，以10mmol/L NaOH溶液作空白，于405nm（參比波長650nm）檢測，其吸光度應(yīng)在0.4A（0.395~0.408A）左右。

• 通道差與孔間差檢測：

• 通道差檢測：取一只酶標(biāo)板小孔杯（杯底須光滑、透明、無劃痕、無污染）以酶標(biāo)板架作載體，分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200uL后置于8個通道的相應(yīng)位置，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長（測定波長490nm，參比波長630nm或650nm）連續(xù)測三次，觀察其不同通道之間測量結(jié)果的一致性，可用極差值來表示其通道差。

• 孔間差的測量：選擇同一廠家、同一批號酶標(biāo)板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065~0.070A）先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。

• 零點飄移：取八只小孔杯，分別置于八個通道的相應(yīng)位置，均加入200ul蒸餾水并調(diào)零，采用雙波長或單波長（490nm）每隔30min測定一次，觀察8個通道4h內(nèi)的吸光度變化。零點飄移是評價儀器在一定時間內(nèi)零點吸光度的變化趨勢，與波長無關(guān)，它間接地反映了儀器內(nèi)部檢測系統(tǒng)在單位時間內(nèi)處于工作狀態(tài)下的穩(wěn)定性及儀器的機械性能情況。

• 精密度評價：每個通道三只小杯，分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長作雙份平行測定，每日測定兩次，連續(xù)測定20天。分別計算其批內(nèi)精密度、日內(nèi)批間精密度、日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。

綜上所述，酶標(biāo)儀驗證是一個復(fù)雜而細(xì)致的過程，涉及多個方面的測試和評估。通過嚴(yán)格的驗證步驟和方法，可以確保酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定可靠，為科研和臨床檢測提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)支持。

酶標(biāo)儀廣泛應(yīng)用于臨床檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域。以下是選擇適合自己的酶標(biāo)儀時需要考慮的因素：

1. 外觀與空間適應(yīng)性：

• 酶標(biāo)儀的體積不宜過大，以適應(yīng)檢驗室有限的空間，避免占據(jù)過多空間，給其他工作帶來不便。

• 外形美觀、小巧的機型更受歡迎。

• 酶標(biāo)儀外殼應(yīng)易于消毒和清潔，以適應(yīng)檢驗過程中經(jīng)常會有樣品液體外濺的情況。

• 操作便捷性：

• 儀器操作應(yīng)簡便，對于國產(chǎn)酶標(biāo)儀，菜單最好使用中文顯示，以方便檢驗人員理解和操作。

• 儀器上應(yīng)有明確的儀器名稱、型號、編號、生產(chǎn)廠家、出廠日期和電源電壓等信息。

• 各調(diào)節(jié)旋鈕、按鍵和開關(guān)應(yīng)能正常工作，外表面無明顯機械損傷。

• 顯示文字應(yīng)清楚完整。

• 技術(shù)性能：

• 酶標(biāo)儀應(yīng)能容納更多的信息，以便于法律評判和醫(yī)療糾紛處理。

• 需要了解酶標(biāo)儀的穩(wěn)定性（漂移）、吸光度測定的準(zhǔn)確度、重復(fù)性、線性以及測定速度等關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)。

• 吸光度測定范圍應(yīng)滿足實驗需求，一般在0~2.5之間即可滿足ELISA的測定要求，但現(xiàn)在已有更高范圍的酶標(biāo)儀，可根據(jù)實驗需求選擇。

• 比色與打印速度：

• 對于標(biāo)本量較大的醫(yī)院或?qū)嶒炇遥瑧?yīng)選擇能夠快速進(jìn)行比色和打印的酶標(biāo)儀，以節(jié)省檢測人員的時間和確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

• 附加功能：

• 根據(jù)實驗需求，可選擇具有震板功能、溫育功能、軟件功能等附加功能的酶標(biāo)儀。震板功能有助于在比色測定前振蕩混勻ELISA板孔內(nèi)的顏色；溫育功能則可使ELISA測定中的微孔板條在儀器內(nèi)部完成溫育過程；軟件功能則提供了對ELISA定性和定量測定及其他測定方式的統(tǒng)計分析并報告結(jié)果的功能。

綜上所述，選擇適合自己的酶標(biāo)儀需要考慮多個因素，包括外觀與空間適應(yīng)性、操作便捷性、技術(shù)性能、比色與打印速度、品牌與售后服務(wù)以及附加功能等。建議根據(jù)實驗需求和實驗室條件進(jìn)行綜合考慮，選擇性價比高的酶標(biāo)儀。